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PEI線(xiàn)性轉染試劑的使用可有什么要領(lǐng)

 更新時(shí)間:2022-07-20 點(diǎn)擊量:932
 
  PEI線(xiàn)性轉染試劑是由一種陽(yáng)離子聚合物轉染試劑,分子量40000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細胞。線(xiàn)性PEI轉染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養基中發(fā)揮作用,即使在有血清存在的情況下,它仍然能高效的將核酸導入細胞。實(shí)驗操作簡(jiǎn)單,對大多數培養細胞都有較高的轉染效率(用于常見(jiàn)細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且細胞毒性較低。
  PEI線(xiàn)性轉染試劑的注意事項:
  1、質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高純度無(wú)內毒素轉染級質(zhì)粒。通過(guò)260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能,請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
  2、細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。
  3、細胞培養液要求:PEI線(xiàn)性轉染試劑可用于有血清培養基的轉染,并且轉染前不需要換培養基。但是制備轉染復合物時(shí)要求用無(wú)血清培養基稀釋DNA和轉染試劑,因為血清會(huì )影響復合物的形成。確保細胞培養液沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時(shí)培養液中不添加抗生素。
  4、DNA濃度和PEI轉染試劑量的優(yōu)化:DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響,初次使用應優(yōu)化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線(xiàn)性PEI轉染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
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