核酸提取(磁珠法)常見(jiàn)的六大問(wèn)題

核酸提取的方法很多，如煮沸裂解法、酚氯仿抽法、濃鹽法、陰離子去污劑法、異硫氰酸胍/苯酚法（Trizol法）、CTAB法原理（植物DNA提取經(jīng)典方法）、離心柱純化、磁珠法提取等，今天我們來(lái)看看核酸提取(磁珠法)常見(jiàn)的六大問(wèn)題，從而更好的了解磁珠法提取核酸。

Q：是不是誤區越多，提取效果越好？

A：不是，磁珠的主要特點(diǎn)是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場(chǎng)作用下以固態(tài)方式和液相分離，ren何試劑體系，磁珠和液體的比例都應該是有一定閾值的，超過(guò)一定的比例，過(guò)多的磁珠將因為無(wú)法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過(guò)程中無(wú)法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過(guò)量的磁珠也會(huì )吸附更多的雜質(zhì)，對于除雜的效果影響非常大。甚至有些時(shí)候，過(guò)多的磁珠會(huì )吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導致整個(gè)試劑盒效率低下。有很多時(shí)候，在提取效果不佳的時(shí)候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最you途徑。
通常情況下，磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過(guò)量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情況并不多，但如果確定是磁珠用量不足導致的提取效果不好，是可以在一定范圍內通過(guò)增加磁珠用量來(lái)改善提取效果的。

Q：試劑使用的越多，是不是提取效果就會(huì )越好？

A：裂解效果不好?多加點(diǎn)裂解液。洗滌效果不好?多加點(diǎn)洗滌液。這是很多客戶(hù)在使用試劑盒中的慣性思維。
但是對于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會(huì )導致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候，雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起到增強裂解和增強洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無(wú)法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定wan全有效。

Q：是不是洗滌次數越多，提取的效果就會(huì )越好？

A：提取得到的核酸雜質(zhì)過(guò)多時(shí)，使用者會(huì )考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數確實(shí)有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會(huì )損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來(lái)說(shuō)洗滌次數控制在2~4次為宜。

Q：取用的樣本越多，提取的效果就會(huì )越好？

A：在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下，往往核酸提取效果不好，很多老師就會(huì )采用多取樣本的方式增加核酸提取量。
但簡(jiǎn)單地增加樣本取樣量，有時(shí)會(huì )引入過(guò)多的雜質(zhì)，超出裂解液裂解能力，也會(huì )使提取效率降低，所以并不推薦通過(guò)簡(jiǎn)單的增加樣本取樣量的方式來(lái)達到增加提取量的目的。如果確實(shí)是由于樣本量不足而引起的提取量過(guò)低，建議在前處理先經(jīng)過(guò)富集或者濃縮步驟再開(kāi)始提取?；蛘咴黾恿呀獾膚an全性，使更多的核酸暴露出來(lái)也是一種解決方法。

Q：某一種磁珠使用效果好，是不是其他實(shí)驗也可用？

A：磁珠的種類(lèi)是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應時(shí)間不同，包被基礎基質(zhì)不同，外層修飾官能團不同，包被密度不同，官能團臂長(cháng)不同，會(huì )導致磁珠特性千差萬(wàn)別。所以不同磁珠所適應的實(shí)驗和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不wan全相同，同樣應用于核酸提取的磁珠，性質(zhì)也并非wan全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表現出了更高的吸附效率，有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應性好但是沉降速度快，更適合磁棒式自動(dòng)提取儀;有的磁珠沉降速度慢但是磁響應時(shí)間長(cháng)，更適合移液式自動(dòng)提取儀。很少有一種磁珠能適用于所有實(shí)驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多數情況下，磁珠和試劑體系都要做一定時(shí)間的配合調整。

Q：和某種試劑盒對比，磁珠的使用效果不佳，是磁珠的問(wèn)題嗎？

A：很多客戶(hù)在篩選磁珠過(guò)程中都是在已經(jīng)成熟試劑體系下，簡(jiǎn)單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。這樣就會(huì )很容易得出某種磁珠效果不好的結論，但實(shí)際上，由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調整過(guò)后才能獲得更好的提取效果。

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