qPCR檢測目前是分子檢測的黃金標準,但是它需要在實(shí)驗室里使用專(zhuān)業(yè)的設備和研究員進(jìn)行操作。等溫聚合酶鏈反應,如環(huán)介導等溫擴增(LAMP)已經(jīng)成為一種適用于POCT檢測的理想方法。
邁迪安的 Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預混液是一個(gè)4x濃度的預混液,包含了優(yōu)化的凍干輔料,適用于開(kāi)發(fā)常溫穩定的檢測。在資源有限的條件下,冷鏈儲運是對POCT檢測的主要限制因素之一,常溫穩定的檢測具有的優(yōu)勢包括減少冷鏈運輸的成本和延長(cháng)產(chǎn)品保質(zhì)期等。 邁迪安公司的Lyo-Ready™RT-LAMP 1-Step Mix可凍干RT-LAMP一步法預混液,使開(kāi)發(fā)高靈敏、高性能的RT-LAMP檢測變得更容易,并且可以提供開(kāi)發(fā)液體和干燥兩種類(lèi)型檢測的靈活性。
和干燥兩種類(lèi)型檢測的靈活性。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預混液(橙色)和供應商N (藍色)分別對連續稀釋的登革熱2型樣本進(jìn)行擴增,比較平均檢測時(shí)間TTR。結果表明,與供應商N相比,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 的反應速度更快,TTR更早,并且重復性更高。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix(橙色)和供應商N(藍色)分別對含有不同濃度的 (A) UTM 和痰液,和(B)唾液,以1:10稀釋的粗裂解液樣本中擴增登革2型RNA。65°C反應60 min。TTR為熒光強度超過(guò)最大熒光值10%的閾值的時(shí)間。結果表明,與供應商N 相比,即使在有高濃度抑制物的UTM、痰和唾液中,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix的平均TTR也更快,反應更靈敏。
試劑性能不受凍干和常溫儲存的影響。
通過(guò)LAMP反應分別對不含(綠色)和含有(藍色)10%UTM 和痰液 的RNA樣本使用PMSD4.1引物進(jìn)行擴增,并且對比干燥后和新鮮配置的反應液在37℃保存3個(gè)月后的性能。TTR為熒光強度超過(guò)最大熒光值10%的閾值的時(shí)間。結果表明,在37℃的條件下,凍干過(guò)程不影響Lyo-Ready™RT-LAMP Mix的穩定性,因此可以推斷凍干后混合物的穩定性可達1年。
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