邁迪安的可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液(MDX116)是一種無(wú)甘油、抗抑性的預混液,專(zhuān)門(mén)為開(kāi)發(fā)從植物樣本中免核酸提取、進(jìn)行DNA直擴的常溫穩定型檢測設計的一款qPCR試劑,適用于從植物裂解液中直接進(jìn)行DNA擴增和對低量污染物的高靈敏度識別,具有多重檢測中高度重現性的穩健擴增。
可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液是市面上shou款用于開(kāi)發(fā)常溫穩定的植物DNA直擴的產(chǎn)品。它結合了抗抑性和可風(fēng)干的優(yōu)勢,為開(kāi)發(fā)高靈敏度,低成本的植物檢測提供了理想的解決方案。一小塊植物葉片在SDS裂解液、堿性裂解液或水中加熱裂解后直接加入風(fēng)干的反應預混液中即可進(jìn)行擴增反應,獲得高靈敏度和可重復性的檢測結果。
可風(fēng)干植物qPCR預混液在干燥前后均能從使用不同裂解液的植物裂解樣本中進(jìn)行高效擴增:
將一片番茄葉穿孔樣本分別加入 (A) 26 μL 0.1% SDS裂解液 和 (B) 堿性裂解液 (20 μL 0.2M NaOH +6 μL 2M Tris-HCl, pH 7.5)在95 °C加熱5分鐘裂解。分別使用干燥前后的可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液對含有5% 和25% 的植物裂解液直接進(jìn)行擴增,檢測番茄Hsp21基因,對比預混液干燥前后的擴增性能。
左圖:使用SDS裂解液,棕色為濕液擴增曲線(xiàn),橙色為使用干燥預混液的擴增曲線(xiàn)。
右圖:使用堿性裂解液,綠色為濕液擴增曲線(xiàn),橙色為使用干燥預混液的擴增曲線(xiàn)。
結果表明,可風(fēng)干植物qPCR預混液在干燥前后均能從使用不同裂解液的植物裂解樣本中進(jìn)行高效擴增。
對低量污染物的高靈敏度識別:
在可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液中加入水稻ATPe引物和探針,然后將混合物進(jìn)行風(fēng)干。分別向40%的番茄葉堿性裂解液中加入1000拷貝(棕色)、100拷貝(橙色)、10拷貝(綠色)和1拷貝(藍色)的水稻基因組DNA,然后用該樣本復溶風(fēng)干的反應混合物,直接進(jìn)行qPCR擴增。結果顯示,可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液zui低可以檢測到番茄裂解液樣本中1個(gè)拷貝的水稻ATPe ,并且達到100%的擴增。
重檢測中高度重現性的穩健擴增:
將水稻ATPe基因(每反應100個(gè)拷貝)和qPCR提取內控DNA(MDX027)添加到25%的番茄葉堿性裂解液中,然后用來(lái)復溶干燥的可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液,對番茄Hsp21基因(棕色)、水稻ATPe(綠色)和qPCR提取內控DNA(橙色)直接進(jìn)行擴增,每個(gè)樣本均有12個(gè)重復。結果顯示了可風(fēng)干植物直擴qPCR預混液在多重反應中的高度重現性。
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