Elabscience Caspase 1活性檢測試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題有什么？如何解決？

Elabscience自主研發(fā)的Caspase 1活性檢測試劑盒采用分光光度法，可用于檢測細胞、組織裂解液或其它樣本的caspase 1 活性。那么你知道Elabscience Caspase 1活性檢測試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題有什么嗎？該如何解決呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、OD405 值偏低或無(wú)信號

1. 焦亡現象不明顯或者細胞處于焦亡晚期，細胞破碎死亡。解決方法：焦亡現象不明顯以及誘導過(guò)度至細胞死亡均無(wú)法有效檢測到 caspase 1的活化，可設置梯度誘導濃度和誘導時(shí)間選擇最佳的誘導方案。

2. 細胞誘導時(shí)的密度太大。解決方法：降低誘導時(shí)細胞的密度，摸索最佳誘導密度，推薦誘導濃密為5~10×105 /mL。

3. 細胞數目太少，Cell Lysis Buffer太多。解決方法：增加細胞的數量，每100萬(wàn)細胞加入50~100 µL Cell Lysis Buffer。

4. 檢測總蛋白量較低。解決方法：使用Bradford 法測濃度，提高蛋白檢測的總量，可以進(jìn)行預實(shí)驗檢測，檢測總蛋白不低于50ug。

5. 溫度較高，Cell Lysis Buffer中的DTT失活，Caspase 酶失活。解決方法：Cell Lysis Buffer 和細胞裂解過(guò)程在冰上進(jìn)行，每 10 分鐘進(jìn)行渦旋混勻一次，充分保證酶活。

6. 細胞沉淀的保存條件不佳，導致細胞降解，Caspase酶失活。解決方法：收集細胞沉淀后立即放入-20℃（1個(gè)月）或者-80℃（2個(gè)月）保存備用，規定時(shí)間內進(jìn)行檢測。

7. 37℃孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)。解決方法：適當延長(cháng) 37℃孵育時(shí)間，建議最佳孵育時(shí)間為1~2小時(shí)內，隨著(zhù)時(shí)間延長(cháng)，control 組的背景數值會(huì )逐漸增大，導致結果偏低。

二、OD405值偏高

1. 細胞處理試劑或者藥物有顏色，且在405nm 波長(cháng)有吸收峰。解決方法：增加細胞離心洗滌的次數，設置細胞處理試劑的空白對照，最終實(shí)驗結果減去藥物試劑的影響。

2. 檢測樣本中有較多氣泡。解決方法：排除氣泡后再檢測。

3. 使用回收的96孔板中有雜質(zhì)附著(zhù)，導致結果偏高。解決方法：建議使用新的一次性 96 孔板。

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