你知道細胞轉染實(shí)驗中轉染效率低的原因嗎？

轉染細胞效率低下的原因在生物醫學(xué)研究中，將外源基因導入細胞以研究其功能或使細胞展現出新的特性是非常常見(jiàn)的實(shí)驗手段。然而，轉染細胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉染細胞效率低下的原因，以期為提高轉染效率提供有益的思路。

1.細胞類(lèi)型和狀態(tài)  

不同的細胞類(lèi)型具有不同的轉染效率。一些難轉染的細胞，如神經(jīng)元和肝細胞，通常需要更復雜的轉染技術(shù)。此外，細胞的生長(cháng)狀態(tài)也會(huì )影響轉染效率，處于對數生長(cháng)期的細胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細胞的話(huà)，貼壁率應該在70-80%；如果是懸浮細胞的話(huà)，應該是6X105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉染前一天換液，轉染前用無(wú)血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個(gè)過(guò)程都不應該有抗生素。

2.轉染方法

選擇合適的轉染方法對提高轉染效率至關(guān)重要。常用的轉染方法包括化學(xué)法、物理法和生物法。每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)，適用于不同的細胞類(lèi)型和實(shí)驗需求?？蒲腥藛T應根據自己的實(shí)驗條件和要求選擇適合的轉染方法。

3.轉染試劑

轉染試劑的質(zhì)量和濃度直接影響轉染效率。一些劣質(zhì)的轉染試劑可能導致細胞毒性過(guò)大，從而降低轉染效率。因此，選擇高質(zhì)量的轉染試劑是提高轉染效率的重要因素。

4.基因載體

基因載體的種類(lèi)和結構對轉染效率具有重要影響。不同的基因載體適用于不同的細胞類(lèi)型和實(shí)驗需求。此外，基因載體的包裝和滴度也會(huì )影響轉染效率。

5.培養條件

細胞培養條件，如培養基、血清和添加劑的質(zhì)量以及培養溫度和濕度等，都會(huì )影響細胞的生長(cháng)狀態(tài)和活力，從而影響轉染效率。一般要在轉染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養基。也可以在原來(lái)的無(wú)血清培養基里面滴加血清

6.轉染用的質(zhì)粒也要保證數量和質(zhì)量，一般要高于2 μg以上。如果質(zhì)粒純度不夠或含有對細胞有毒害的物質(zhì)，會(huì )影響轉染效率。

7.操作手法

脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來(lái)，從培養皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節，但是，如果不注意的話(huà)，影響轉染效率。

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